• Tome un vaso químico pequeño, aproximadamente 100mL, y agregue 80mL de agua del grifo.
• Tome una bolsa de celofán de aproximadamente 9 cm de longitud y amárrela bien por un extremo con un hilo, el amarre debe ser tal como explicará el profesor de laboratorio. Añada solución de KMnO₄ dentro de la bolsa de celofán (a 10mL de agua mezcle unos cristales de KMnO₄); el KmnO₄ es una sustancia tóxica por ingestión, tenga cuidado y lávese las manos con agua y jabón si tiene contacto con ella. Amarre el otro extremo de la bolsa y enjuague bien con agua del grifo.
• Coloque la bolsa dentro del vaso químico y observe como comienza a escaparse de ella el KmnO₄. El KMnO₄ se escapa de la bolsa por diálisis (tal como se estudiará más adelante). Después de 3 minutos, saque la bolsa y bótela.
• Observe las manchas violeta del KMnO₄ dispersas en el agua y describa su apariencia (anote cómo se va difundiendo el KMnO₄ en el agua a medida que transcurre el tiempo). 40 minutos después, vuelva a observar y compare con lo anotado en la observación anterior.
• Discuta sus observaciones con sus compañeros y emita sus conclusiones acerca de cómo ocurre la difusión del KMnO₄.

• Colocar con mucho cuidado, mediante un capilar de vidrio, igual cantidad de tres cristaloides (cada uno en un lugar diferente, como si se tratase de los vértices de un triángulo, ver figura).

• Medir con una regla (graduada en mm) el diámetro del halo coloreado que se forma en torno a cada muestra, cada 15 minutos (por un total de 90 minutos).
• Llene las tablas correspondientes. Confeccione las gráficas y obtenga conclusiones válidas para esta experiencia.
• ¿Se puede decir que ocurrió difusión de los cristaloides en el agar? ¿Qué factor afectó la mayor o menor difusión de los cristaloides en el agar? ¿Qué sustancia mostró mayor velocidad de difusión en el agar y Por qué?

• Confeccione las tres gráficas en el mismo papel (Desplazamiento vs tiempo). Calcule la pendiente de la gráfica obtenida para cada sustancia. Esta pendiente representa la medida de la velocidad de difusión en el agar (mm/min.). Confeccione una nueva tabla a partir de las velocidades obtenidas y trate de confeccionar una nueva gráfica; obtenga un aproximado del peso molecular del desconocido a partir de la gráfica (interpolando o extrapolando, según el caso).

C. Estudio de la Difusión mediante el Espectrofotómetro (Método cuantitativo para el estudio de la difusión):

• Tome 4 tubos de ensayo que sean iguales en tamaño y diámetro (y que tengan capacidad para 16 mL de agua, cada uno). Cada tubo debe estar completamente limpio y seco. Colóquelos en una gradilla (ésta debe estar colocada en un sitio sin movimiento).
• Agregue 0,5g de cristales de CuSO₄ en el fondo de cada tubo (vea la figura).
• Con mucho cuidado, agregue 15 mL de agua en cada tubo. El agua debe correr suavemente por las paredes; la punta de la pipeta debe ser colocada a la misma altura de cada tubo (si es necesario, marque el sitio en donde colocará la punta de la pipeta). A medida que completa el volumen de agua en cada tubo, anote la hora.

• Prepare el espectrofotómetro (ajuste el aparato a 595 nm) y la cubeta conteniendo el "blanco" (en este caso será agua destilada)
• Tome una muestra de 7mL del tubo nº1 a los 15 min. de haberlo preparado y transfiérala a una cubeta de espectrofotómetro; mida la densidad óptica (DO) de la muestra a 595 nanómetros (nm).
• Tome una muestra de 7mL del tubo nº2 a los 30 min. de haberlo preparado y transfiérala a una cubeta de espectrofotómetro (mida su DO).
• Tome una muestra de 7mL del tubo nº3 a los 45 min. de haberlo preparado y transfiérala a una cubeta de espectrofotómetro (mida su DO).
• Tome una muestra de 7mL del tubo nº4 a los 60 min. de haberlo preparado y transfiérala a una cubeta de espectrofotómetro (mida su DO).
• Confeccione una tabla de DO vs tiempo y su gráfica

• Los valores anteriores no tendrán significado para nosotros si no tenemos medidas de DO a partir de patrones conocidos de CuSO_4. Para esto preparamos 6 patrones (1%, 2%, 3%, 4%, 5% y 6%). Confeccionamos una tabla con los valores correspondientes de DO vs % de CuSO₄ (tabla nº2) y una gráfica (llamada la "Curva de Calibración") a partir de tales valores.

• ESPECTROFOTOMETRíA
• USO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

• Armar el sistema tal como se ve en el diagrama (la pipeta debe ser la de menor diámetro que pueda conseguir, preferible de 1.0 mL o de volumen menor).
• El contenido del vaso es agua destilada y dentro de la bolsa de celofán se coloca solución de sacarosa 40%.
• La pipeta debe estar sostenida mediante un soporte metálico y su respectiva pinza; el amarre de la bolsa de celofán debe estar sumergida en el líquido. Cuando se prepare la punta de pipeta dentro de la bolsa, la bolsa debe apretarse y amarrarse bien para que quede con apariencia de estar hinchada (no debe quedar aire dentro de ella porque entonces no funcionará el experimento).
• Observe cualquier cambio en el nivel de líquido cada 2 minutos (durante 20 minutos).
• Si es posible, confeccione una gráfica con sus resultados y emita sus conclusiones.

• Armar el sistema tal como hizo en la parte anterior (observe el diagrama).
• En este caso, el contenido del vaso es solución de sacarosa 40% y dentro de la bolsa de celofán se coloca agua destilada.
• Tal como hizo en el experimento II-A, la pipeta debe estar sostenida mediante un soporte metálico y su respectiva pinza; el amarre de la bolsa de celofán debe estar sumergida en el líquido. Cuando se prepare la punta de pipeta dentro de la bolsa, la bolsa debe apretarse y amarrarse bien para que quede con apariencia de estar hinchada y no debe quedar aire dentro de ella. Sin embargo, en este nuevo caso, debe haber agua destilada hasta la boca de la pipeta (o sea, hasta arriba); para esto, debe tapar la boca de la pipeta con el pulgar y un compañero debe amarrar la bolsa en el extremo de ella para que no se salga el líquido.
• Observe cualquier cambio en el nivel de líquido cada 2 minutos (durante 20 minutos).

• Tome tres tubos de ensayo y enumérelos.
• Tubo Nº1: 2 gotas de sangre y 6mL de agua destilada.
• Tubo Nº2: 2 gotas de sangre y 6mL de solución 0.85% de NaCl.
• Tubo Nº3: 2 gotas de sangre y 6mL de solución 2% de NaCl.
• Observe la apariencia física de los tres tubos y emita sus conclusiones.
• Tome una gota de agua destilada y colóquela sobre un portaobjetos; coloque menos de una gota de sangre en el agua y revuelva rápidamente (con un palillo de dientes). Coloque un cubreobjetos y observe mediante un microscopio. Esta parte la misma condición del tubo Nº1 8sólo que si se toma una muestra de él se hace más difícil observar los "fantasmas de eritrocitos").
• Tome una muestra de los tubos Nº2 y 3 (dos gotas) y colóquela sobre un portaobjetos, colóquele un cubreobjetos y observe a través del microscopio. Compare y dibuje lo observado.
• Recuerde que el contenido de NaCl en los eritrocitos es 0.85%.

• Realice un corte muy fino de la superficie de la hoja de Rhoeo (cara violeta de la hoja).
• Coloque el corte de Rhoeo sobre una gota de agua; observe mediante el microscopio. Fíjese en la apariencia del citoplasma de la célula y hasta donde se observa el color violeta dentro de ella (en relación con la pared celular).
• Mediante un pedazo de papel toalla colocado en el borde del cubreobjetos, retire el agua y reemplace con solución de NaCl 2%. Observe ahora el color violeta del citoplasma en relación con la pared celular.
• Compare ambos casos (con agua y con solución de NaCl) y emita sus conclusiones.

• Tome un vaso químico de 200mL y añada 50mL de agua.
• Tome una bolsa de celofán de aproximadamente 9 cm de longitud y amárrela bien por un extremo con un hilo, el amarre debe hacerse tal como explicó el profesor de laboratorio.
• Prepare una mezcla de solución de glucosa y almidón en partes iguales (10 mL de cada una) y agréguela en la bolsa. Amarre bien el extremo (dejando un pedazo de hilo para poder manipular la bolsa) y lávela bien debajo de un chorro de agua del grifo.
• Deje la bolsa dentro del agua por aproximadamente una hora y media (ó más). Una vez pase este tiempo, bote la bolsa. Tome dos muestras del contenido del vaso (de 1mL cada una) y coloque cada una en un tubo de ensayo.
• A la primera muestra realícele la prueba de Benedict (a un volumen de muestra agregar igual volumen de Benedict). Observe y emita conclusiones.
• A la segunda muestra realícele la prueba con el Lugol (a un volumen de muestra una gota de lugol). Observe y emita conclusiones,

• Tome 4 tubos de ensayo de igual tamaño y diámetro, y márquelos con un número (del 1 al 4).
• Consiga un trozo de papel con algo escrito en él.
• Coloque 3mL de cada sustancia (cada una en concentración 0,3 M) en un tubo de ensayo distinto:

 *Use Guantes

• Tome 4 tubos de ensayo de igual tamaño y diámetro, y márquelos con un número (del 1 al 4).
• Consiga un trozo de papel con algo escrito en él.
• Coloque 3mL de cada alcohol en un tubo de ensayo distinto (agite bien la botella antes de servirlo):