TRABALHO SOBRE MICROSCOPIA

CURSO DE BIOLOGIA MARINHA E PESCAS

CADEIRA DE BIOLOGIA GERAL, Docente Sonia Merino([email protected])

Elaborado por Rui Freitas 6/98

 

CONCEITO

E A ARTE DE OBSERVAR ATRAVEZ, E COM O MICROSCÓPIO OU SEJA UM CONJUNTO DE CONHECIMENTO QUE SE OBTÊM NO ESTUDO DOS OBJECTOS MICROSCÓPICOS

MICRÓLOGIA = TRATADO ACERCA DOS SERES OU OBJECTOS MICROSCÓPICOS.

 

INTRODUÇÃO

A célula é um micromundo cujas as estruturas só podem ser observadas com o auxilio de instrumentos e técnicas especializadas que comporta alguns riscos dos quais é necessário estár consciente. Sendo assim ouve uma convergençia de várias técnicas que ao longo dos tempos permitio estabelecer uma verdadeira « Anatomia das células ». Pelo geral o poder resolvente do olho humano é de 0.1mm, ou seja a menor distançia vista ou resolvida pelo olho humano é de duas linhas a 1mm de distançia, sendo evidente, isto prova a nessecidade do aparecimento do microscópio,ex: duas linhas a 100 um de distançia, veremos uma só linha.

A descoberta da célula, tal como todo o conhecimento humano, foi resultado de um longo percurso de investigação envolvendo interacção de ideias e invenções de técnicas

HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO

Cronologicamente até o seculo XVII conhecia-se bastante sobre os orgãos que constituem os seres vivos, mas não sabiam como eram organizadas e constituidos(em unidades mais pequenas, as células)isto na época de Galileu que interessou para esse problema e fez quase um microscópio.

Neste mesmo século um Holandês, vendedor de roupas e especialista em lentes Anthony Van Leeuwenhoeck(1650-1700)construio o 1º microscópio simples que concistia, apenas numa única lente montada numa moldura simples, com um cistema para segurar o objecto à distançia. Van o usava para examinar tudo desde da água,à sua propria saliva.

Comunicou as descobertas, por carta á Royal Society de Londes onde na descrição dizia que descobrio pequenos animais(os protozoários ex: vorticela)e foi o primeiro homem a ver bactérias, e na época considerou-se a descoberta dum 3º mundo dos microrganismos(x270). Esses animais com fama(1676)foram designados anímáculos onde havia uma péssima imagem com lentes defícientes e com uma imagem pouco nitidas e deformadas.

30 anos mais tarde «tecidos fibrosos» «rete mirabile = rede maravinhosa» « papa» «lodo» e sucos nobres são algumas das designações usadas pelos cientistas do sec. XVII para descrever matéria viva. Robert Hook(1636-1703)pública o livro Micrografia onde é o 1º a descrever células. Examinou uma lámina muito fina de cortiça e coloco-a num dos 1º microscópios simples construidos, que é constituido por uma única lente e mais tarde associaram-se duas ou mais lentes até o microscópio composto simples que permitiram observações mais precisas das estruturas animais e vegetais. O seu aprofeiçoamento ao longo do sec. XVII iria permitir um avanço no estudo dos seres vivos. Contribuio tambem um zoológo, Malpighi(1628-1694).

Da célula Hook vio apenas as paredes esquelécticas, sem intervir na natureza real e na sua individualidade. Os seus trabalhos no entanto encorajaram outros cientistas a utilizarem o microscópio na observação de material bíologico.

A hipotese Hooke admitio que todos os seres vivos são constituidos por células(que eram porções de matéria que podiam ou não estar envolvidas por uma parede, citoplasma, nucleo.

Foi preciso 150 anos para que a noção de célula adquirisse o significado que têm hoje.

No sec. XVIII em 1838-39 entre uma conversa dos cientistas alemões, Schleiden o zoológo e Schwan o botânico, nasceu ou foi inuciada uma téoria geral da célula(Teoria Celular)que modificou as ideias no tempo e no espaço; « a celula é a unidade básica do metabolismo que contêm material hereditário e fisiologica, sob o ponto de vista estrutural e funcional, dos seres vivos e ou seja todos os organismos são constituidos por células, onde se desemrolam as reacções da vida ».

Robert Brown(1831-1839)descrobrio o nucleo nas células vegetais,e um tempo depois o biologista alemão e médico Virchow(1855)acrescentou a teoria celular com « elas multiplicam-se por divisão dependente duma continuidade genetica entre célula mãe e células filhas»

A teoria celular constitui um grande marco da ciençia em geral,e da micróscopia em particular.

Foi decissivo e essencial para tornar comprêncivel o desenvolvimento embrionário, e das leis da heriditariedade.

Com o aprofeiçoamento do micróscópio, acomularam-se as provas sobre essa teoria unificadora da biologia, porque se foram observando cada vez mais estruturas no interior da substânçia gelatinosa da célula. Foi-se modificando e evoluindo a mecânica e a óptica do microscópio até os nossos dias onde existe o Microscópio Composto(Óptico)

Já na antiguidade se observaram, atravez de lascas de cristal trasparente, com superficíes curvas, dão imagens ampliadas dos objectos.

Desde então a biologia do sec.XVIII progredio em passos lentos devido à insuficiencia de meios materias e ópticos para observação dos « imfinitamente pequenos » ou fragmentos dos tecidos e de orgão de seres superiores.

A invenção do microscópio permitio preencher uma grande lacuna da ciençia onde hoje é possivel decompolos e estuda-los em dois tipos:

--MICROSCÓPIO COMPOSTO OU ÓPTICO

--MICROSCÓPIO ELECTRÓNICO

 

MICROSCÓPIO COMPOSTO OU ÓPTICO

Este aparelho fornece imagens ampliadas dos objectos, permitindo portanto a observação de estruturas invisiveis à vista desarmada. Haviam vários defeitos nestes microscópio no principio do sec.XIX a nivel do acromatismo e esfericidade que actualmente já foram corregidos com uma associação de lentes fabricados com materias especiais para esse fim, e as imagens têm vindo a ser mais nitidas e cada vez mais premenorizado. A ampliação é feita atravez de dois cistemas de lentes de ampliação(objectivas e oculares)suportados por uma série de péças mecânicos que permitem uma utilização prática desse aparenho.

A ESTRUTURA DO MICROSCÓPIO ÓPTICO

Pé, Coluna

Tubo

Parafusos(micrómétrico e macrométrico)

 

PARTE MECANICA

Platina

OU ESTATIVO

Revolver

Sistemas de objectivas x20,x40,x100 etc...

Sistema oculares

PARTE ÓPTICA

Sistemas de iluminação

Espelho

Plano

Côncavo

Condensador

Diafragma

 

As OBJECTIVAS são formadas por uma associação de lentes inceridas num suporte metálico e têm uma escritura na parte externa com o seu poder resolvente e de ampliação. A ampliação proporcionada pelo microscópio óptico deve-se em geral a uma conjugação do poder de sistemas de objectivas e do sistema ocular a ser usado; ex: 40xocular,120x objectivas= 40x100= 400 vezes

de ampliação. Normalmente a ampliação tem limites,e se usar ampliações muito grandes as imagens começam a perder qualidade. Falando do poder resolvente que tinhamos falado anteriormente(ex: duas linhas....), o poder resolvente é calculado com os parametros:

1º o comprimento de ondas electromagnéticas de luz radiada que é limitádo(luz visivel entre 400nm a 700nm ou 0.01 um de comprimento)é limitádo para esse microscópio, e que é calculada atravez da velocidade da luz 300000 m\s sobre o tempo de uma onda.

 

2º NA objectivas e NA condensador = que são aberturas numéricas da objectiva e do condensador,onde NA é uma caracteristica especifica do sistemas de lentes ex: NA = n. sen #, n=indice de refração, # formado pelo eixo óptico.

Poder Resolvente = comprimento de onda da luz visivel

NA objectivas + NA condensador

 

 

Sendo assim o poder de resolução máxima é de 200 - 250 nm e o aumento máximo é de 1500x.

Neste microscópio o tipo de radiação é a LUZ natural ou artificial, daqui que as amostras podem ter animais vivos ou mortos e de preferençia fino e montado em material transparente, lâminas e lamelas de vidro, sobrepostas umas nas outras geralmente com amostras finissimas. LENTES em geral de vidros

DIAFRAGMA é um despositivo mecânico que serve para diminuir ou aumentar e evitar a incidênçia da luz que dificulta a observação de amostras muito finas e fica situado debaixo da plataforma e que serve de mediador entre a luz que vem do espelho ou lâmpada até ás amostras.

A imagem trasmitida é geralmente colorida.

O campo do microscópio tem uma certa profundidade, dai a possibilidade de podermos focar vários planos, ou seja, quando focamos um plano o de baixo e de cima ficarão desfocados como se fessem pequenas alturas diferentes e assim sucessivamente para os outros planos.

Para movimentar a imagem para outras posições deve-se deslocar a lamina sempre no sentido oposto a que queremos ir(mas actualmente à parafusos especiais na plataforma,e com precisão para esse fim ou seja para movimentar a amostra)(e ainda existem actualmentente parafusos micrometros para visualizar nitidamente no mesmo plano, e parafuso macromero para focar a imagem).

TIPOS DE MICROSCÓPIO COMPOSTO

MICROSCÓPIO DE CAMPO LUMINOSO as amostras podem ser coradas ou não, ex: bactérias coradas, serve para determinação de elementos morfológicos. Aumento 1000-2000 vezes todos os m. compostos.

MICROSCÓPIO DE CAMPO OBSCURO amostras não coradas e utilizan-se lentes que desviam raios luminosos onde aparece iluminado as amostras com fundo escuro e os microrganismos vão exibir alguns dados morfológicos caracteristicos em estado vivo e em suspenção liquida.

 

MICROSCÓPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA utiliza como fonte de luz as radiações ultraviolectas onde é vantajoso nas radiações visiveis e de condições de visibilidade e podem ser em amostras coradas e não coradas e podem ser fotografadas e deferençia-se os componentes e estruturas intra-celulares com maior ou menor absorção das diferentes partes atravez da luz ultra violeta.

MICROSCÓPIO DE CONTRASTE DE FASES se desviam raios luminosos com uma grande intencidade, com vários graus de brilho, e fazem-se exames de estruturas celulares em células vivas de microrganismos maiores: leveduras, algas, protozoários e bactérias.

MICROSCÓPIO DE FLUORESCENÇIA brilhante a corado por cor fluorecente e usa-se para técnicas diagnósticas com diferentes organismos e com diferentes fluoresçencia onde vai revelar a sua propria identidade como micrôrganismo.

 

 

A PREPARAÇÃO DE MATERIAL BIOLÓGICO PARA M. OPTICO

Deve ser feita temporariamente ou exporádicamente ou de preperação defenitiva, e deve-se ser de pequena espessura e é colocada sobre a lamina, mergulhando sobre solusões aquosas à ocasião. Ou tambem « in vivo » meio mormal de vida das células e com solusão de Ringer.

Há coloração especificada para ver diferentes e especificados organelos citoplasmática.

Podem ser os processos: 1º Colheita,2ºFixação, 3º Desindiatação, 4º Inclusão, 5º Corte, 6º Colagem, 7º Desparafinação, 10º Montagem. E etc....

Vantagens do Microscópio Composto Óptico

Maior poder separador ou de resolução ou seja capacidade de distinguir X do Y aos permenores.

Quanto á luz, menor for o comprimento de onda maior é o poder resolvente do microscópio e o de luz ultravioleta menhora extraordináriamente as qualidades da imagem quanto aos permenores.

 

 

MICROSCÓPIO ELECTRÓNICO

O fisico francês De Broglie em 1924 descobrio que os electrões possuiam uma natureza ondulatória e que as radiações ultravioletas tinham menor comprimento de onda. Assim sendo na decada de 30 o Prof. E. Ruska em 1933 constroi o 1º microscópio electrónico que na sua natureza é bastante volumoso e complexa tendo uma mesa com todos os comandos incluindo um monitor e com um tubo metálico com vários metros de comprimento.

Na sua natureza á um emissor de de feixes de electrões quanto á radiação, um conjunto de lentes electromagnéticas, um cistema condensador, de objectivas, e de projectil.

O comprimento de ondas usado é variável entre 0.005 nm.

O poder de resolução maxima varia entre 0.5-0.2 nm = 500x m.óptico =10 Angst.

E o poder de ampliação maxima de 250000X -500000X -1000000X de vezes.

O seu funcionamento, no interior exige uma pressão de vácuo exagerado de(0.0001 a 0.0000001 mmHg), a uma voltagem de 4000 a 100000 volts, onde os seres vivos não conseguem suportar vivos(uma desvantagem)por serem muito delgados(uma prévia preparação), permitirão um nº suficiente de electrões o atravesse e forme uma imagem observadas de ultra-estruturas.

Bibliografia usada:

EDMA Enciclopédia do mundo actual, Biologia Molecular 1979 Charles Favrod

Biologia(10º Ano de escolaridade)Mercês Roque e Adalmiro Castro 1º ed. 1986

Microbiologia(Bibliotéca ISECMAR)

Biologia ciençia da vida 10º Ano 1991 Amparo Dias da Silva / Fernanda Gramaxo / Jorge Mesquita / Maria Esmelinda Santos/ Otilia Cruz /

Célula Viva de Oliver Gallier

 

 

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